项目	内容
细胞名称	HepG2-mCherry-eGFP-LC3B（人肝癌细胞稳转株）
细胞别称	HepG2-mCherry-GFP-LC3B；HepG2-LC3（部分供应商使用此名称）
商品货号	WC040
种属来源	人
年龄性别	15岁，男性（白人）
组织来源	肝脏，肝细胞癌（hepatocellular carcinoma）
生长特性	贴壁生长
细胞形态	上皮细胞样
背景简介	HepG2细胞系于1975年从一名15岁白人男性的肝癌组织中分离建立。该稳转株通过慢病毒系统在HepG2细胞中稳定表达mCherry-EGFP-LC3B双荧光自噬报告融合蛋白。当自噬发生时，自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体，溶酶体的酸性环境使EGFP绿色荧光淬灭，而耐酸的mCherry红色荧光得以保留。因此，黄色斑点（mCherry⁺/EGFP⁺）代表自噬体，红色斑点（mCherry⁺/EGFP⁻）代表自噬溶酶体，可用于实时监测自噬流。
功能与应用	1. 实时、动态监测细胞自噬流（从自噬体形成到自噬溶酶体降解的完整过程）； 2. 筛选和评估自噬激活剂/抑制剂； 3. 研究自噬在肿瘤、代谢疾病等中的机制； 4. 适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜观察及流式细胞术定量分析。
生物安全等级	BSL-1
细胞规格	1×106cells/T25培养瓶或者1-2mL冻存管包装
支原体	无
培养基	常规培养条件：DMEM高糖 + 10% FBS + 1%青霉素-链霉素（双抗）。当实验过程中需要确保荧光信号强度时，可根据实际需求选择以下两种策略： 策略一：持续性稳定维持（适合长期需求荧光的实验） 在常规培养基中添加嘌呤霉素（Puromycin）进行维持性筛选，推荐工作浓度为1–2 µg/mL（最佳浓度需通过预实验确定）。此方法适用于在整个实验周期内持续保持稳转株遗传稳定性和荧光强度。 策略二：阶段性加压筛选（适合荧光减弱后恢复） 细胞反复传代后，外源融合蛋白表达可能逐渐衰减，导致荧光强度下降。若实验对荧光亮度有严格要求，可采用周期性加压筛选进行富集。具体操作如下： 1. 备种与保种：收到细胞后，应先传代培养至少3次，并冻存足量种子细胞，然后再进行筛选，以免筛选失败丢失细胞株。 2. 起始筛选浓度：从含1 µg/mL嘌呤霉素的完全培养基开始处理。 3. 逐步提高浓度：观察细胞状态，若悬浮死亡细胞比例< 40%，可逐级提升药物浓度至2 µg/mL → 3 µg/mL → 4 µg/mL，每升一级需待细胞恢复稳定后再进行下一步。 4. 异常情况处理：若在某浓度下悬浮死亡细胞超过60%，应立即撤去药物，换用无药完全培养基恢复培养；待细胞汇合度达到80%左右时，再以该失败浓度重新进行筛选，直至细胞能够耐受该浓度。 5. 筛选终点：当细胞能在4 µg/mL嘌呤霉素中正常增殖且形态良好时，可停止加压筛选，换用不含药物的完全培养基进行常规培养（若后续实验周期较长，也可考虑保留低浓度药物以维持稳定性）。
培养条件	气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件	冻存液：55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO（或90% FBS + 10% DMSO，或无血清冻存液）；液氮储存。
倍增时间	HepG2母细胞系倍增时间~30-60小时
注意事项	1. 定期药筛：建议每传8–10代用嘌呤霉素筛选一次，防止未携带外源基因的细胞过度生长； 2. 光源选择：EGFP用488 nm激发，mCherry用561 nm激发； 3. 对照设置：实验应设阳性对照（如氯喹抑制自噬降解、雷帕霉素诱导自噬）和阴性对照； 4. 传代比例：建议1:2 至1:4，每2–3天换液或传代； 5. 支原体检测：定期检测，确保无污染。