一、GS115感受态细胞

感受态组成	保存	规格
GS115 Chemically Competent Cell	-80℃（6个月）	100μL×10支
酵母促转化剂	-20℃（12个月）	50μL
毕赤酵母转化液	-20℃（24个月）	5mL

二、产品介绍

GS115是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌的污染和生长。GS115毕赤酵母自身表型为Mut+，但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。

毕赤酵母适宜的生长温度是28℃至30℃，温度超过32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是组氨酸缺陷型（His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。GS115毕赤酵母可以在YPD培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。质粒转化毕赤酵母GS115的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。

基因型为：His4；表型：Mut+ 

三、操作方法

1. 取需转化质粒5µg，酶切，回收；

2. 取一支无菌的1.5mL EP管，依次加入预冷的线性质粒1-5µg（体积不高于15µL），酵母促转化剂5µL，100µL冰上融化的GS115感受态细胞，毕赤酵母转化液500µL，轻轻翻转混匀6-8次；

3. 30℃水浴30min，每15min轻轻翻转混匀6-8次；

4. 每支加入20µL的二甲基亚砜（用于提高转化效率，也可不做）；

5. 42℃水浴15min，每7.5min轻轻翻转混匀6-8次；

6. 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加1mL的YPG Plus（或YPG）于30℃复苏1h（用于提高转化效率，也可不做）；

7. 12000rpm瞬时离心弃上清，用100µL 0.9% NaCl重悬，涂板，30℃培养3-7d。 

四、注意事项

1. 使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。

2. 转化液低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。

4. 12000rpm瞬时离心指离心速度升到12000rpm时立即停止离心。

五、发表论文时请标注

1. 发表[中文论文]请标注：xxx由“来尔文（武汉）生物医药研究院”提供；

2. 发表[英文论文]请标注：xxx was kindly provided by LEVIN (wuhan) Institute of Biomedical Research.

六、联系方式​

电话：13155297675（企业微信同号） | 邮箱：wuhan_institute@elevin.cn

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